植物亞硝基谷胱甘肽還原酶(GSNOR)酶聯(lián)免疫分析試劑盒說明書

使用目的：

本試劑盒用于測定植物樣本中亞硝基谷胱甘肽還原酶(GSNOR)含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中植物亞硝基谷胱甘肽還原酶(GSNOR)水平。用

純化的植物亞硝基谷胱甘肽還原酶(GSNOR)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗

的微孔中依次加入亞硝基谷胱甘肽還原酶(GSNOR)，再與 HRP 標記的亞硝基谷胱甘肽還原

酶(GSNOR)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。

TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的亞硝基谷胱甘肽還原酶(GSNOR)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中植物亞硝基谷胱甘肽還原酶(GSNOR)濃度。

植物亞硝基谷胱甘肽還原酶(GSNOR)酶聯(lián)免疫分析試劑盒組成

1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶

2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品（80ng/L） 0.5ml×1 瓶

3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶

4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份

5 顯色劑 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張

6 顯色劑 B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個

標本要求

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能

馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

植物亞硝基谷胱甘肽還原酶(GSNOR)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作步驟

1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀

釋。

40ng/L 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液

20ng/L 4 號標準品 150μl 的 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

10ng/L 3 號標準品 150μl 的 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

5ng/L 2 號標準品 150μl 的 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

2.5ng/L 1 號標準品 150μl 的 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、

待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，

然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡

量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此

重復 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同 3。

8. 洗滌：操作同 5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

10 分鐘.

10.終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.測定：以空白孔調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止

液后 15 分鐘以內(nèi)進行。

操作程序總結(jié)：

計算

以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的

OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標

準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，

即為樣品的實際濃度。

植物亞硝基谷胱甘肽還原酶(GSNOR)酶聯(lián)免疫分析試劑盒注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未

用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間zui好

控制在 5 分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4．請每次測定的同時做標準曲線，zui好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD 值

大于標準品孔孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計

算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 個月