小反芻獸疫病毒檢測試劑盒的檢驗方法主要包括病毒分離培養(yǎng)和鑒定、聚合酶鏈式反應（PCR）、熒光定量PCR、抗體ELISA檢測、瓊脂凝膠免疫擴散試驗以及膠體金試劑卡檢測。
1.病毒分離培養(yǎng)和鑒定
病毒分離：采集病料如眼瞼下結膜分泌物、鼻腔分泌物、頰部、直腸黏膜拭子等，接種至羊腎原代細胞或VERO細胞中培養(yǎng)。
病毒培養(yǎng)：將處理過的樣品接種到已形成良好單層的細胞中，置于37℃吸附1小時，傾去接種液，加入維持液后繼續(xù)培養(yǎng)，逐日觀察細胞變化。
病毒鑒定：通過觀察細胞病變情況，如細胞變圓、集合等現(xiàn)象，結合病毒中和試驗進行陽性判定。
2.聚合酶鏈式反應（PCR）
引物設計：使用特定的上下游引物進行PCR擴增。
擴增程序：經(jīng)過一系列溫度循環(huán)后，通過電泳分析PCR產(chǎn)物，若在特定位置出現(xiàn)特異性擴增條帶則判為陽性。
3.熒光定量PCR
引物和探針：使用特異性引物和熒光探針。
結果判定：根據(jù)擴增曲線和Ct值判斷樣品是否為PPRV陽性。
4.抗體ELISA檢測
原理：采用阻斷ELISA方法原理進行檢測。
操作：嚴格按照商品說明書操作和判斷結果。
5.瓊脂凝膠免疫擴散試驗
操作步驟：取血清樣品與標準血清、抗原分別加入瓊脂板的孔中，靜置后移入濕盒內(nèi)室溫反應。
結果判定：根據(jù)沉淀線的出現(xiàn)與否及其與陽性對照的關系判斷結果。
6.膠體金試劑卡檢測
操作方法：使用商品化的膠體金試劑卡，按照說明書進行操作和判斷。
更新時間：2025-01-14
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